Metoder for Måling NADPH-Oxidase

The enzymet NADPH oksidase er identifisert som en produsent av reaktive oksygenforbindelser i prosesser, inkludert vekst av vaskulære glatte muskelceller. Disse reaktive arter som er knyttet til en rekke sykdommer, innbefattet høyt blodtrykk, diabetes, kreft og inflammasjon, metoder for å overvåke aktiviteten av dette enzym er kritisk for utvikling av mulig behandling. NADPH oksidase

NADPH oksidase tilhører en familie av enzymer som hjelper med elektron overføring mellom NADPH og oksygen. Imidlertid har NADPH oksidase den unike evnen til å produsere reaktive oksygen arter fra denne reaksjonen, sammenlignet med andre familiemedlemmer der reaktive oksygen arter er generert via andre midler. En multimeric protein kompleks, NADPH oksidase består av membran-bundet B558 flavocytochrome, som brukes som et mål markør.
Reaktive oksygen arter (ROS) Generation
p Som den viktigste kilden til ROS, spesielt hydrogen peroxide, produserer NADPH oksidase små, men konsistente mengder via sin isoform uttrykt i blodkar, som er involvert i signalering prosesser. Dette konsistent produksjon etter hvert kan overvelde naturlig antioksidant systemet, forårsaker et tap av beskyttende forbindelser som for eksempel nitrogenoksid, og generering av enda kraftigere ROS.
Chemiluminescence Metode

Chemiluminescence muliggjør svært følsom, automatisert måling av NADPH oksidase aktivitet over en rekke konsentrasjoner. I denne metoden blir NADPH substrat tilsatt til en vevsprøve inneholdende NADPH oksidase. Ved omsetningen blir ROS genereres og reagerer med forbindelsen lucigenin å produsere en chemilluminescent effekt, som er målt. Luminescens er direkte proporsjonal med NADPH oksidase aktivitet, som enzymet bestemmer hastigheten av reaksjonen.
Kinetic Assay via flowcytometrisystemer

I denne metoden, er vevsprøver analysert via flowcytometri. Benmarg er separert fra prøven ved hjelp av Hanks 'balanserte saltoppløsning. Spesifikke flekker og oppdage antistoffer er lagt til utvalget i polystyren rør. Prøven blir deretter inkubert, ble vasket med Hanks balanserte saltoppløsning, som er påført molekylære prober og fremstilt av strømningscytometri. Kontrollrørene er også laget for sammenligning og for å kalibrere strømningscytometer. Maskinen er så løp og målinger registrert.