Retrovirus infeksjon Protokoller

inneholder en RNA genomet som er innkapslet i en capsid og lipid konvolutt, retrovirus inneholder polypeptidkjeder som hjelper koble dem til reseptorer i membraner av vertcellene de infiserer. Mens de fleste cellenes arveanlegg er kodet i DNA, som av retrovirus finnes i RNA, retrovirus også bære enzymet revers transkriptase, slik at de holder seg til verten DNA. Visse protokoller er fulgt av laboratorier i målrettet infeksjon av DNA cellen med disse virusene. Klargjøre Laboratory

Visse laboratorie utstyr er nødvendig for å hjelpe til i prosessen med retrovirale infeksjon. Utstyret omfatter en pipette hjelpemiddel, en pipette-mann, en vev kultur hette, 37-grader Celsius og 32 grader Celsius inkubatorer, og en Eppendorf sentrifuge. Forsyninger inkluderer vevskulturplater, en engangs Pasteur pipette, kvalifisert retrovirale supernatanten, filter-steriliseres polybrene og filter-steriliseres protamin sulfat.
Klargjøre Cell for infeksjon

Prior til infeksjon, må målet celler deles i en vev-kultur plate og inkubert over natten i en 37-graders Celsius inkubator med fem prosent CO2. Formålet med Inkubasjonstiden er å danne celler som er 50% konfluent. Forberedelse av cellene på forhånd er nødvendig for å sikre at cellene er optimalisert for infeksjonsprosessen. Nolan Lab ved Stanford University anbefaler at celle infeksjon alltid begynne start ved å infisere NIH 3T3 celler til å bidra til å optimalisere resultatene av testen.
Infisere celler
< p> Etter inkubasjonstiden er over, bør forskerne sørge for at cellene er både sunn og riktig samløpet. Ved hjelp av vev-kulturen hette, er det cellulære materiale og aspirert en viral supernatant er brukt til cellene. Når anvendt, må platen være forsiktig rystet frem og tilbake for å sikre at den er jevnt fordelt. Celler bør deretter spin-inokulert ved å plassere dem i Eppendorf-sentrifuge og spinne dem ved 2500 rpm i nitti minutter ved en temperatur på 30 grader Celsius. Etterpå bør cellene inkuberes ved 32 grader Celsius for én til to dager. Viruset blir deretter erstattet med de utklipte celler og plassert inn i kuvøse for å bli analysert alt fra tre til syv dager etter den første infeksjonen.