Biotinylering Protocols

biotinylering er prosessen med å knytte biotin, eller vitamin H, til et protein eller andre molekyler. Denne vitenskapelige prosedyren er mest brukt i bioteknologi og molekylærbiologi forskning som involverer DNA, proteiner og antigener, som er molekyler kroppens immunsystem gjenkjenner som inntrengere. Biotinylering protokoller inkluderer biotinylering av antistoffer og peptider, samt celleoverflate biotinylering. Biotinylering av Antistoffer

vil koble biotin til antistoffer proteiner produsere når et antigen kommer inn i kroppen, teknikere bruke natriumbikarbonat (NaEC03) ved pH 9; dimetylsulfoksid (DMSO);

NHS -Biotin og en saltløsning stoff som kalles PBS. Prøver ble blandet med natrium-bikarbonat, som er senere tilsatt til NHS-biotin i DMSO. Løsningen blir så tilsatt til de analyserte antistoffer og inkubert på en del av utstyret som kalles en rotator i fire timer ved romtemperatur eller over natten ved 39,2 grader Fahrenheit. Til slutt ble løsningen fortynnet med PBS.
Celle overflaten biotinylering

celleoverflaten biotinylering protokollen, teknikere bruke vev kultur, fosfat-bufret saltvann (PBS) på pH 7,4 og sulfosuccinimidyl-2-(biotinamido)-etyl-1 ,3-ditiopropionat bufferoppløsning for å balansere surhet som inneholder aminogrupper og TrisCl ifølge Nåværende protokoller i protein Science.The cellene blandes med biotin og bufferløsning, dekantert og sentrifugert . Solid innhold og spesifikke proteiner er senere analysert på en gel elektroforese plate.
Biotinylering av Peptider

å utføre biotinylering av peptider er reagenset brukes NHS -SS Biotin, ifølge Philip Shepherd i "monoklonale antistoffer: en praktisk tilnærming." Peptider er korte fragmenter av aminosyrer, de molekyler som danner proteiner og DNA. I denne protokollen, er den kommersielle løsning NHS-SS Biotin oppløst i vann. Deretter peptid prøven tilsettes til det, sammen med natrium-bikarbonat for å balansere surhetsgrad eller pH. Løsningen ble deretter incubert på is i to timer. Teknikere kan observere prøven med eller uten biotin molekyler.