Den TMRE Protocol

tetramethylrhodamine etyl (TMRE) er en "slow, lipophilic, kationiske fluorescerende reditribution fargestoff" brukt i MitoPT ™ TMRE /TMRM mitokondriemembranen Potential Assessment Kit, produsert av immunokjemisystemer Technologies, LLC. Prosessen bidrar til å vise et transmembrant elektrisk potensial gradient i cellene. Forberedelse av analysen

Protokollen er enkel å følge, og tar ca 20 minutter å behandle på 37 grader Celsius. De levende celler som brukes i analysen, kan ta mellom flere timer og flere dager for å klargjøre den for bruk. De kontroll celler kan ta flere timer å forberede, så de trenger å bli overtalt til å gjennomgå apoptose.
Protocol Del 1

Kultur celler til en tetthet optimal for apoptose eller oksidativt stress induksjon, i henhold til dine spesifikke induksjon protokollen, men ikke overstige 10 (6) celler /ml.
Protocol Part 2

Samtidig tid, kultur en ikke-indusert negativ kontroll cellen befolkningen (med samme tetthet som den induserte befolkningen.
Protocol Del 3

indusere apoptose eller med hensikt depolarize mitokondriene følgende ønsket protokoll.
Protocol Del 4

Forbered 1X analysen /Wash Buffer.
Protocol Parts 5 til 8

Klargjør en mM eller 0,2 mM MitoPT ™ TMRE /TMRM lager. For Protocol del 6, utarbeide en 1:100 fortynning av 1 mM, eller en 1:20 fortynning av 0,2 mM MitoPT ™ TMRE /TMRM løsning for spiking i cellekultur prøver.

For Protocol del 7, beis celler ved hjelp av en endelig 20-200 nM konsentrasjon av MitoPT ™ TMRE /TMRM løsning.

For Protocol Del 8, analysere data.