Perfusjons Technique

Perfusjonen teknikk gir rask og jevn fiksering til alle individuelle celler i vev. 4 prosent paraformaldehyd fiksativ føres via det vaskulære systemet for å oppnå vev av interesse. Den viktigste målområde for legemiddeladministrering i et bestemt organ, kan identifiseres ved hjelp av denne teknikk. Perfusjon har også hjulpet forskere til å forstå den strukturelle og funksjonelle organiseringen av den menneskelige hjerne. Ting du trenger, Animal (rotte eller ape)
Perfusjons pumpe, beger
Fixative (4 prosent paraformaldehyd)
Sprøyte nåler
Perfusjons drypp satt
Saks
Scalpel
Pinsett
0,9 prosent saltvann
Ice box
Vis flere Forbered
en

frisk 4 prosent paraformaldehyd ved å blande 40 g paraformaldehyd i 800 ml vann. Varm løsningen til 60 C under omrøring. Avkjøl løsningen til 4 C. Juster pH-verdien til 9,5 ved hjelp av et pH-meter. For å justere pH, tilsett iseddik å oppnå ønsket pH
2

Sett opp perfusjon pumpe;. Feste alle glassdelene og perfusjon nål. Run 100 ml springvann gjennom slangene i perfusjons pumpen for å fjerne eventuelle rester fra glassdelene. Plasser et beger av bindemiddel i en isboks.
3

Åpne enden av perfusjon røret og legg den i et bindemiddel beger. Scale volumet av oppløsningen i henhold til størrelsen av dyret. Nå justere perfusjon pumpe ventilen til en langsom, jevn drypp. Lukke ventilen. Fyll perfusjon apparat med 0,9 prosent (vekt /volum) saltvannsoppløsning.
4

Sett opp kirurgi instrumenter nærheten operasjonsbordet. Gi en anestesi injeksjon til dyr i henhold til sine kroppsvekt (0,5 mg ketamin /kg). Plasser dyret på operasjonsbordet med ryggen ned.
5

Skjær et snitt med en skalpell, langs lengden av mellomgulvet. Med de store saks, butte side ned, skåret bindevev i bunnen av membranen. Expose hjertet. Hold det bankende hjertet med tang og sette inn en nål inn i venstre hjertekammer.
6

Åpne ventilen på perfusjon pumpen til at strømmen av 0,9 prosent saltløsning. Sørg for at løsningen flyter fritt og dyret er i live. Hjertet av dyret bør være kontinuerlig juling. Når blodet blir erstattet med saltvannsoppløsning, endre løsningen på 4 prosent paraformaldehyd.
7

Stopp perfusjon og dissekere en vev av interesse. Hold vev i samme medium ved 4 C.