TPA Rensing Protocols

Tissue plasminogenaktivator eller TPA er en type serinprotease, som er i stand til å ødelegge protein blodpropp. TPA er funnet i cellene som innvendig dekker blodkarene. TPA-protokoller er en del av den farmasøytiske og medisinske forskning på strøk, så vel som hjerte-og lunge-sykdommer, for eksempel lunge-emboli og myokardinfarkt. TPA rensing refererer til isolering av dette protein fra andre molekyler gjennom en rekke prosesser, inkludert kromatografi og elektroforese. Rensing av TPA fra Hog Kidney
p Dette protokollen blir brukt i studier av fibrinolyse, prosessen av å bryte et produkt av koagulering kalt fibrin, relatert til dannelsen av tumorer. Teknikere trekke TPA fra aceton-tørket gris nyre med kaliumacetat buffer, ved pH 4,2. Deretter legger de ammonium sulfate å indusere celle nedbør. De legger n-butyl-sefarose til prøvene, som så blir analysert på en chromatographer. Con A er også lagt til og chromatograph.y å skille forskjellige proteiner er utført.
Rensing av TPA fra kinesiske hamstere og E. coli-Cells

Protein renhet er en viktig faktor i suksessen til biologiske eksperimenter. Renset TPA er også kommersielt tilgjengelige, og dermed spare tid og unngå risikoen for å risikere eksperimentet på grunn av dårlig rensede løsningen. Denne protokollen innebærer renseprosessene av TPA i pattedyr og bakterieceller. Teknikere utløse celleprøver, filtratet dem og utføre tilhørighet og gelkromatografi analyse. Senere, de analyserer og sammenligner resultatene, før kommersiell produksjon.
Expression of Active Menneskelig TPA i E. coli

avklart cellelysater legges til en lysin - Sepharose-kolonnen, analysert i et chromatographer og vasket med en oppløsning av natrium-klor. En annen prøve er lastet opp på en annen kromatografikolonne inneholdende proteiner som bindes til TPA med en meget høy affinitet. En prøve fra den andre kolonnen blandes med en oppløsning av sink-Sepharose. Den resulterende protein viser mer enn 90 prosent renhet, ifølge tidsskriftet "Applied and Environmental Microbiology."