Parafin Inkludering Protocol

Scientists vanligvis trenger å stivne biologiske prøver til § dem av. Dette gjør det enklere for forskere å legge fargestoffer, antistoffer og sonder til biologisk prøve. Det reduserer også overlapping av ulike cellelag. Forskere bruke paraffinvoks som en hard matrise for kutting, siden parafinen ikke blander seg med vann. Parafin er en type hydrokarbon. De biologiske prøvene inneholder vann, så forskerne må tørke prøvene som bruker stadig mer konsentrert etanol bad. Xylen

Forskere fjerne etanol ved hjelp av xylen. Så de bruker smeltet parafinvoks for å fjerne xylen. For lysmikroskopi, de parafinsnitt er vanligvis fem mikrometer tykt. Parafinvoks er ikke vanskelig nok for tynnere skiver. Forskere rehydrere vevet ved hjelp av xylen først, deretter etanol. Så skyll den biologiske prøven med destillert vann for å unngå forurensning.
Feste


parafininnstøpt vev er vanligvis fast med nøytral bufret formalin, som er den kommersielle versjonen av formaldehyd. Dette inkluderer paraformaldehyde og metanol, som hindrer formaldehyd fra å konvertere til maursyre. Tynne skiver vev trenger 48 timer med fiksering ved romtemperatur for optimal histologi, som er studiet av mikroskopiske anatomi. Ellers vevet vil stivne og bli sprø. Før behandling, er det vevet som regel lagret i 70 prosent etanol ved en temperatur på 4 grader Celsius.

Parafin Prosessorer


Forskere bruker ofte parafin prosessorer for å sende vevet gjennom bad som gradvis dehydrerer materialet før varm parafin kan gå inn gjennom vev. Forskere kjøre prosessoren over natten. Prosessoren varmer bare vevet i en viss tid avhengig av vev for å gjøre at det ikke blir hardt og sprøtt. Prosessoren bruker et vakuum som gir raskere gjennomtrengning av parafin og fjerner luftbobler. Når behandlet, vev lagret i kassetter ved romtemperatur.
Wax Melting


parafin smelter i en time før du legger vevet. Hele kassetten er plassert i en 65 grader Celsius parafinbad i 15 minutter. En kald aluminium kjøleribbe kjøler parafinvoks i 20 minutter. Når voks sprekker eller vev ikke er riktig justert, smelter forsker på parafin og gjentar prosessen.
Cutting


Når seksjonering vev, får forskeren vannbadet til 35 til 37 grader Celsius. Vannet er friskt og avionisert. Blokkene er plassert med forsiden ned på en isblokk eller kjøleribbe i 10 minutter. Et blad kutter blokken i seksjoner. To problemer som kan oppstå er fattige ribboning og fragmentering prøver. Når prøvene fragment, vannet for varmt. Om blokken ikke bånd godt, bør du sette den tilbake på isen blokk og firmaet opp voks før du starter igjen.