Cell Frysing Protocol

Sikrer cellene gjennom frysing er viktig for forskning, veterinærmedisin og husdyravl fordi det gjør at cellene skal lagres over lengre tid. Den frysemetode valgt, må imidlertid redusere eller forhindre skade på cellen. Den kryopreservering middel og metoden kan avhenge av celletype. Forberedelse

Cells bør fryses når de er friske og aktivt vokser med 90 prosent levedyktighet. Forsiktighet bør tas på kjøreegenskaper og høy hastighet sentrifugering og sprek pipettering eller utsuging bør unngås for å opprettholde levedyktigheten og hindre celleskader.
Kryobeskyttelse

kryobeskyttelse agent er brukes som en erstatning for intracellulær vann. Midlet forhindrer iskrystaller og dehydrering som oppstår i cellene. Sterilisert glyserol og steriliseres dimetylsulfoksyd blir ofte brukt ved en konsentrasjon på 5 prosent til 15 prosent (volum per volum) fortynnet i enten kalvefosterserum eller vekstmedia, avhengig av celletype.
Underkjølt og bagasje

Celler i det iskalde blandingen bør kjøles sakte. Hvis en programmerbar fryseren ikke er tilgjengelig, kan cryovials pakkes inn i vev eller plassert i styrofoam, som kan bremse frysing. Cellene skal holdes på minus 80 grader Celsius i 24 timer og deretter overført til flytende nitrogen for langtidslagring.
Tining

Frozen celler skal ikke tines raskt. Et vannbad ved 37 grader Celsius kan brukes. Forsiktighet bør tas med celler som er lagret i flytende nitrogen, kan imidlertid som flytende nitrogen inn ampuller og kan eksplodere ved tining. Frysing blanding skal fortynnes i vekstmedier. Cell levedyktighet bør vurderes med fargestoff trypan blå og celler dyrket som normalt.