MBP Rensing Protocols

MBP eller maltose bindende protein finnes i bakterien Escherichia coli, som er en del av tarmfloraen hos mennesker og dyr. Rensingen av MBP innebærer en rekke prosedyrer som tar sikte på å separere proteinet bestanddeler. I molekylærbiologi, er MBP rensing en viktig prosess for studiet av struktur og funksjon av dette proteinet. MBP rensing protokoller inkluderer MBP smeltet proteiner rensing, småskala MBP-fusion og maltose bindende protein fusion tag rensing. MBP Smeltet Proteiner Rensing

Under denne protokollen, teknikere vask 20 ml av polymeren amylose harpiks med ATRIS løsning ved pH 7,4, natriumklorid, merkaptoetanol (ME) og etylendiamintetraeddiksyre (EDTA), i henhold til protokoller Online. Celleprøver er lagt, sentrifugeres og analyseres på gel elektroforese. Prøver er også analysert i en chromatographer, der teknikere eluatet eller observere løsningens bestanddeler mens passerer gjennom kromatografikolonne.
Småskala MBP-fusion protein rensing

Ifølge Det hebraiske universitetet i Jerusalem, biologer bruker reagens isopropyl BD-1-thiogalactopyranoside (IPTG), spin cellekultur i 10 min ved 8000 omdreininger i minuttet på 39,2 grader Fahrenheit. Senere, fjerne de overliggende væske og blande kald PBS-buffer til prøven, som er delt opp i flere rør og sentrifugert på nytt. Prøvene blir deretter holdt ved -112 grader Fahrenheit for posterior analyse.

Maltose Binding Protein Fusion Tag Rensing

Affinity kodene er genmodifisert molekyler ansatt i molekylærbiologi å oppdage og rense proteiner. Denne protokollen er et komplekst sett av prosedyrer delt inn i tre stadier, som inkluderer bygging av polyhistidine protein markør (HisMBP), et pilotforsøk for å vurdere løseligheten av protein, og storskala rensing av MBP molekyler, ifølge Nature Protokoller . Bortsett fra E.coli prøver, teknikere bruke ampicillin, kanamycin, IPTG, anhydrotetracycline, glukose monohydrat, cellelysis buffer, DNA polymerase, PCR primere, Tris-acetat-EDTA og etidiumbromid.