Hva er hensikten med syrefast Farging?

I mikrobiologi, flekker en bakterie betyr å farge det med et fargestoff for å se det mer tydelig under et mikroskop. Hvis bakteriene ikke er farget, vises de klar og fargeløs, og det er vanskelig å se sine former. Bortsett fra sine former, er hvor lett en bakterie farget av visse flekker - hvis i det hele tatt - ofte gir en ledetråd for å identifisere bakteriene. Syrefaste farging er en type av flekker som er effektive på enkelte bakterier som ikke kan bli farget av andre metoder. Differential Farging

å farge en vanlig bakterie, flytende beis påføres raset i omtrent ett minutt, deretter skylles av med vann. Differential flekker bruker forskjellige flekker for to forskjellige bakterier i samme lysbilde. For eksempel, i en gramfarging, blir sleiden først farget med krystall fiolett og jod, deretter avfarget med alkohol. Celler som er gram-positivt, vil beholde den mørk purpurfarge på den første flekken selv etter at alkohol er brukt, mens Gram-negative celler vil returnere til fargeløs. Deretter en ny beis påføres, i en kontrastfarge som rosa, og Gram-negative celler vil bli rosa, mens de Gram-positive celler vil holde sin opprinnelige flekken.
Historie

Noen bakterier har tykke cellevegger består av lipider, byggesteinene i fett, noe som gjør dem voksaktig og nesten vanntett. Dette betyr at en normal flekken kan ikke trenge gjennom cellen. I 1880, ble forskerne prøver å studere Mycobacterium tuberculosis, bakterien som forårsaker tuberkulose. Men det ville ikke holde en vanlig Gram flekken med mindre det var oppslukt av flekken i opptil 24 timer. Paul Ehrlich, som senere utviklet det første stoffet effektivt mot syfilis, utviklet syrefaste flekker å tvinge flekken inn i bakteriene. Ehrlich metode tok bare 45 minutter, mens moderne syrefaste flekker teknikk tar bare 5 minutter.
Method

å tvinge fargestoff, vanligvis Carbol-fuchsin , inn i bakteriene må det varmes over et begerglass med kokende vann i 5 minutter, mens dekselet er kontinuerlig oversvømmet med beis og ikke tillates å tørke ut. En alternativ metode for å varme er å bruke modifisert Kinyoun Carbol fuchsin beis, som ikke trenger å være oppvarmet, men det er viktig at sleiden ikke tørker ut i løpet av 5 minutter nedsenking i flekken. Uansett hvilken primære farging metoden er brukt, er lysbildet avfarves med syre alkohol - ikke vanlig alkohol - og farget med en sekundær counterstain av en annen farge for å vise de andre bakterier som kan være tilstede. Bakterier som primært flekker forbli er etter decolorizing med syre alkohol kalt syrefaste.
Organism forholdsregel

Mycobacterium tuberculosis er ekstremt farlig, og er kun undersøkt på sykehus og kliniske anlegg som har separate rom eller spesialdesignet overføring hetter for å hindre forurensning. Det er ulovlig å bruke det i en akademisk laboratorium. I stedet er Mycobacterium smegmatis brukt, men den har en mye tynnere cellevegg enn M. tuberculosis, så det er lettere å tilfeldigvis over-decolorize raset og fjerne den primære flekken.
Procedural forholdsregel

Carbol-Fuchsin røyk er giftig, så når oppvarming dem, bruk et avtrekksskap å inneholde røyk og lufte dem utenfor. Også for å unngå farene ved oppvarming slides, kan ha en Kinyoun Carbol fuchsin brukes i stedet, som har en høyere konsentrasjon av fenol og fuchsin, to aktive stoffer i flekken, og ikke trenger å bli oppvarmet for å trenge inn i bakterier.