PBMC Protocol

cryopreserved perifere mononukleære blodceller (PBMC) er en hyppig kilde til prøver for forskning som inkluderer immunotherapies og reaksjoner på vaksiner. Mens noen protokoller er begrenset til isolering og frysing faser av prosessen, andre inkluderer tine prosedyrer. Isoleringsprosedyren og underkjølt Fremgangsmåte

En kommersiell forbindelse for å fremme separasjon er plassert i hver 50 ml sentrifuge-rør, og rørene sentrifugert i tretti sekunder. Caps av reagensrør er sprayet med alkohol før åpning, deretter antikoagulant-behandlet fullblod deretter overført via pipette inn sentrifugeglassene. Plasma laget av blodet suges med en pipette.
Frysing

celler fra forrige trinn vil da bli sentrifugeres med saltløsning tre ganger. Etter et celletall, blir prøvene sentrifugeres deretter oppslemmet i frysemedium. Prøver i frysemedium er neste fordelt mellom cryovials i én ml mengder. Hetteglass lagres over natten i en

-70 º C fryser og flyttet til langtidslagring i flytende nitrogen neste dag.
Sikker Tining

cryovials overføres fra flytende nitrogen til en 37 ° C vannbad og prøven fikk tine ett til to minutter. En varm transport medier blir lagt til hvert hetteglass. Fortynnet cellesuspensjon sentrifugeres i syv minutter. Antallet og celleviabilitet er sjekket, Hvis cellene trenger å konsentrere seg, er prøvene sentrifugeres syv minutter. Prøven fortynnes til å jobbe løsning og hvilte 12-18 timer før du begynner eksamen i den angitte protokollen

Referanser
  Biomed Central:. Protokoll for Isolation , Nedfrysing og tining av PBMCs
  Nettverk for Bukspyttkjertelen organdonorer med Diabetes: Isolering av perifere mononukleære blodceller (PBMC)
Resources
  Los Almos National Labs: antistoffanalyse i PBMC
  Vitenskapsmenns Solutions: Isolering lymfocytter fra blod.