Konkurransedyktige Bindingsforsøk Protocol

Konkurransesituasjonen bindingsanalysen er et eksperiment som bestemmer bindende kapasitet av proteiner eller kjemikalier for spesialiserte proteiner som finnes på en celle overflate , kalles reseptorer . Metoden er ofte brukt i medisinsk forskning, men er også i stand til å bestemme hvilke stoffer binder seg til reseptorer og modifisere reseptoraktivitet , som igjen kan forandre celle- adferd . Celleforberedelsen

Re- suspendere celler i iskald fosfat saltløsning ( PBS ) . Mål protein konsentrasjon for å bekrefte like protein nivåer ved hjelp av en spesialisert kommersielt tilgjengelig protein analysen.
Analysen

Legg en radioaktivitet - merket protein kjent for å binde seg til reseptoren , den ligand , til cellen eller vevet suspensjon . Tilsett konkurrenten , som er testmedikament eller proteinet som studeres og inkuberes med det radioaktive ligand og cellesuspensjon . Et område av konsentrasjoner av testlegemidlet bør studeres . Etter inkubasjon , separat bundet og ubundet ligand og måle radioaktivitet .
Data Analysis

Den vanlige tiltak som skal bestemmes er halve den maksimale konsentrasjonen som hemmer reseptor ellers kjent som IC50 . Dette er beregnet ved å plotte konsentrasjonen med en logaritmisk skala på X-aksen til grafen , mens Y-aksen står for prosent av inhibering , en sigmoid kurve , noe som er en S- form, bør bli generert. IC50 er 50 prosent hemming punkt, og tilsvarende konsentrasjon kan leses fra grafen.