Plaque Assay Method

Analysesett er en teknikk som brukes for å isolere og rense virus og til å bestemme virale titere (den laveste konsentrasjon av viruset som fører til infeksjon). En plakett analysen, opprinnelig kalt en virologisk analysen, ble utviklet for å måle og telle smittsomhet av bakteriofager. Ifølge Biologi-Online.org, var det senere også brukt til å telle pattedyr virus. Fakta

En plakett er en konfluent, monolag kultur av celler. Den danner som et resultat av infeksjon med en av cellene av en enkelt virus partikkel ifølge Biology-Online.org. Når cellen er infisert replikerer virus og til slutt dreper cellen. Videre nylig kopiert viruspartikler spredt, infisere og drepe de nærliggende celler.
Funksjon

I en plakett analysen, er kulturen først farget med en bestemt farge. Dette die flekker bare levedyktige (live) celler, ifølge Biology-Online.org. Som et resultat, kommer de døde cellene uten flekker i kultur, mot den fargede bakgrunn. Foreløpig er plakk analysen brukes til å gjenkjenne celler som produserer antistoffer som ødelegger erytrocytter ved hemolyse.
Egenskaper

Erytrocytter er celler (også kalt røde blodlegemer ) som inneholder et hemoglobin og transportere oksygen og karbondioksyd i blod, fra lungene og vev. Hemolyse oppstår når erytrocytter bryte åpne og slipp hemoglobin, ifølge Biology-Online.org. Som et resultat, i den plaque-analysen, er grunnlaget klar plakk, og angir at de røde blodlegemer er hemolysert av antistoffene.
Fremgangsmåte Del I

Ti -fold fortynninger av et virus lager er forberedt før du utfører en plakett analysen og 0,1 ml aliquiots er satt på til cellemonolagene. Denne blanding inkuberes i en tidsperiode, slik at viruset har tid til å angripe cellene. Videre er monolag dekket av et næringsmedium som inneholder en substans (vanligvis agar), ifølge "gjenkjenner virus: A Plaque Assay" av Vincent Racaniello. Næringsmediet danner en gel, og etter at kulturen inkuberes, de opprinnelige infiserte celler frigi virale avkom. Gelen begrense spredningen av viruset til omliggende celler, og som et resultat, gir den infeksiøs partikkel en sirkulær sone som kalles en plakett. Med tiden vokser plakett til en størrelse synlig med det blotte øye og fargestoffer brukes til å forbedre visning.
Method Part II

virustiter er beregnet i plakk forming units, kalt PFU, per milliliter. De telles og, til minimert feil, blir bare plater som inneholder mellom 10 og 100 plakk tellet. Videre, i henhold til "oppdage virus: en plakett analysen," for hver 100 telles plaketter samme titer vil variere med pluss eller minus 10 prosent. Derfor estimert feil av en plakett analysen er om lag 10 prosent, når utført riktig.