Adherente celler protokoll

celler i kultur er enten et skjema dyrket i suspensjon, slik som blod, eller celler som fibroblaster som krever en overflate til hvilken de kan feste seg. Noen av de overflater kan kreve belegg i forskjellige ekstracellulære matriser, avhengig av celletype og studier. Alle cellekulturer krever må utføres aseptiske betingelser. Optimalt miljø

De fleste celletyper kan dyrkes i Dulbeccos modifiserte Eagles medium (DMEM) eller Roswell Park Memorial Institute (RPMI) med tilsetning av 10 prosent føtalt kalveserum, 2 milimoles i aminosyre glutamin og antibiotika, for eksempel, 100 enheter penicillin og 0,1 milligram per milliliter streptomycin. Celler blir opprettholdt i sine medier i en fuktet inkubator ved 37 grader Celsius og 5 prosent karbondioksid.
Splitting

Cells bør sjekkes daglig for infeksjon, død eller vekst . Når vevskultur kolbe er 80 prosent belagt i cellene, bør cellene deles for å opprettholde cellenes helse og logg-vekstfase. Mediet ble fjernet og cellene ble vasket i fosfatbufret saltvann. Adherente celler krever tilsetning av trypsin og etylendiamintetraeddiksyre (EDTA) for å fjerne celle adhesjon proteiner. Forsiktig røring bør fjerne cellene. Media må legges for å nøytralisere trypsin /EDTA-løsning.
Ompodning

utvannet celler og tryspin /EDTA løsning kan sentrifugeres til pellets og vask cellene. Cellene kan bli re-suspendert i media og utvannet og replated inn i nye flasker. Hver gang cellene deles cellene passasje antall økes med én.
Media Endre

Media bør endres to ganger i uken ved å fjerne de gamle mediene og erstatte med nytt, varmet media.