PCR Basics

Polymerase Chain Reaction (PCR) er en metode for DNA replikering. Metoden er oppkalt etter DNA-polymerase, benyttet et enzym for å katalysere prosessen med DNA-replikasjon. Kary Mullis utviklet teknikken i 1984 og ble tildelt Nobelprisen i kjemi for sitt arbeid i 1993. Anvendelser av PCR

Vanlige anvendelser av PCR inkluderer DNA fingerprinting (der DNA-fragmenter er isolert og sammenlignet mot eksisterende data), analyse av ekstremt lite utvalg mengder (som gjør forskerne i stand til å rekonstruere utdødd organismer og avdøde historiske tall) og sykdom diagnose (inkludert viral DNA og kreftforskning)
PCR komponenter

Nødvendige komponenter og reagenser av en PCR reaksjon er:. genomisk DNA (malen til replikere); to primere (en forover og en bakover) komplementær til den sekvensen, DNA-templat en reaksjon cocktail (inkludert Taq-polymerase og en bufferoppløsning som inneholder en levedyktig miljø hvor reaksjonen vil forekomme), og underlaget for Taq enzym . (nukleotider som vil hjelpe "bygge" de enkelte tråder) |
Steps of PCR

Trinnene i reaksjonen er: Denaturering (der temperaturen er hevet å skille DNA mal tråder), avspenning av primeren (der temperaturen er avkjølt for å oppmuntre frittflytende primer sekvenser å følge isolerte DNA mal tråder), og Extension (der Taq polymerase fester seg til primer og bruker gratis -flytende nukleotider å gjenskape hver isolerte DNA mal Strand). Repetisjon av denne prosess flere ganger vil isolere hver replikert sekvens fra sin opprinnelige DNA-templat. Hver repetisjon øker eksponensielt mengden av replikerte DNA til det er en tilstrekkelig mengde for den ønskede eksperimentet. For optimal temperatur og andre forhold, se Yale universitetets "Designing PCR programmer" i Resources, nedenfor.
Stadier av PCR

Reaksjonen kan også beskrives i tre trinn : Amplification (under hvilken DNA blir replikert eksponensielt); utflating (hvor den Taq-polymerase taper aktivitet), og platået (ved hvilket tidspunkt ikke noe mer produkt kan fremstilles i den aktuelle reaksjon). For en interaktiv demonstrasjon av PCR reaksjon, se University of Utah "PCR Virtual Lab" i Resources, nedenfor.