Tissue Culture tips

vevskultur er forplantningen av celler i et flytende dyrkningsmedium i laboratoriet for forskjellige vitenskapelige formål. For eksempel er vevskulturer anvendes i diagnose av genetisk sykdom, som et medium for dyrking av intracellulære patogener som bakterier eller virus, eller i undersøkelser i cellene selv. Vevskulturstudier Cells

Noen celler holder seg til bunnen av petriskåler eller forbli suspendert i væsken. Cellene kan være av plante-eller animalsk opprinnelse. Celler som brukes i vevkulturer kan være primære celler, hvilket betyr at de ble høstet direkte fra en organisme, eller av en cellelinje som er blitt opprettholdt i kultur. Cellelinjer er ofte kreftceller, og dette må tas i betraktning når du planlegger eller tolke eksperimenter.
Treat Cells forsiktig

Adhererende celler blir fjernet fra sin petriskål for passering av skraping eller med en protease, vanligvis trypsin og EDTA. Skraping dreper mange celler, og bør bare brukes når du forbereder cellelysater (flytende preparater av celleinnholdet for analyse) eller når trypsin /EDTA absolutt må unngås.

Trypsinizing fjerner ikke bare de proteinene som holder cellene til parabolen men de fleste andre proteiner på membranen i cellen, også. Celler ballen opp og ta litt tid, vanligvis over natten, for å gjenopprette en obligasjon med parabolen. Legge en minimal mengde av trypsin - rundt 1 ml for en 25cm2 kolbe - vugging av kolben i fem sekunder eller mindre å belegge monolag, og ved deretter å helle av eller aspirering av overskytende trypsin vil redusere mengden av trypsin til hvilken monolaget er eksponert. La cellene hvile i inkubatoren i løpet trypsinization.

Etter at cellene gli av bunnen av fatet, legge til media med serum og suge lysatet opp og ned pipetten forsiktig. Tillate litt media å forbli i fatet som du pipette opp og ned flere ganger for å bryte fra hverandre klumper og få en jevn suspensjon.

Ikke suge bobler inn i pipetten. Også, ikke kraftig blanding eller vortex cellen suspensjon;. Cellene er svært skjøre i denne balled-up state
å varme Inaktivere eller ikke Heat Inaktivere

Når cellekultur teknikker var i sin barndom, ble føtalt bovint serum (FBS), kjent for å inneholde komplement-proteinene, som er immunsystemet proteiner som lyse cellene. Komplement proteiner er ikke ønskelig i cellekultur. Heat-inaktivere FBS på 56 grader Celsius i 30 minutter vil gjengi komplement proteiner inaktive. Prewarming FBS til 37 grader C også er nok til å inaktivere komplement proteiner.

I de tidlige dager, varme inaktivere FBS også drept mykoplasma og andre forurensninger. På den tiden ble filter sterilisering utført med 0.45um filtre. I dag har vi filter sterilisere FBS og media gjennom 0.1um eller 0.04um filtre. Ingen mycoplasma vil slippe gjennom at
p Dette etterlater oss spørsmålet om ikke å varme inaktivere

Heat inaktivering forringer alle komponenter i FBS -.. Som vitaminer, aminosyrer og vekstfaktorer -. muligens under terskelen for noen pirkete cellelinjer
p Hvis du arbeider med en saktevoksende eller pirkete cellelinje, vurdere bare filtrere sterilisering din FBS. Du kan finne dette øker robustheten i cellene dine.