Hvordan forberede agarplater

Molekylærbiologi og bakteriologi bruke agarplater til kultur mikroorganismer som bakterier for eksperimentering. Den agar er det middel som stivner, eller geler, et flytende næringsmedium som kreves av mikroorganismen til å overleve og vokse. Når overført til en agarplate, bakteriene vokse inn i forskjellige kolonier (hvis dyrket i lave konsentrasjoner) eller flekker (hvis dyrket i høye konsentrasjoner) og kan høstes for analyse. Biologer forberede agarplater, som prosessen krever tilgang til laboratorie-grade reagenser og maskiner og en god forståelse av molekylærbiologi og sterile teknikker. Du trenger:
Hansker
Lab frakk
Ansiktsmaske
bunsenbrenner
laminær hette
Sterile petriskåler
10g Bacto-trypton
5g gjærekstrakt
15g agarose
1 ml 1N NaOH
sterilt destillert vann
glassflaske
Autoclave tape
Autoclave
Supplements, f.eks antibiotika som ampicillin
Vis flere instruksjoner
en

Ta på egnet verneutstyr, inkludert hansker, en lab frakk og munnbind, og rense alle overflater. Arbeidet ved siden av en bunsenbrenner eller, fortrinnsvis, i et sterilt laminær strømningshette. Dette hindrer luftforurensning fra å falle inn i agar.
2

Fjern bunken med petriskåler fra emballasjen, men sparer for nedpakking av agarplater. Etiketten den ytre overflate av fatet (ikke lokket) med typen agar og datoen for tilberedning. Lå platene ut som et enkelt lag med lokkene fjernet for å gjøre fylling av agar enklere.
3

Bland Bacto-trypton, gjærekstrakt og agarose sammen og deretter legge til natriumhydroksid (NaOH) løsning. Legg sterilt destillert vann for å oppnå 1L av næringsmedier. Overføre denne løsning til en glassflaske med minst 1,5 l volum. Løst skru på lokket av flasken og merke datoen for tilberedning og navnet på mediet. Legg en stripe av autoklav tape på flasken og autoklaver det i 25 minutter. La flasken kult å ikke lavere enn 45 grader Celsius (eller det vil stivne for tidlig), men ikke høyere enn 50 grader Celsius. Du kan lagre flasker med avkjølt og størknet agar ved 4 grader Celsius, og deretter varme til flytende. Ved behov for spesielt eksperiment eller stamme av bakterier, legge til riktig type og mengde supplement som antibiotika. Hvis media er for varmt, vil tilskuddene bli ødelagt, så nøye sjekke temperaturen på mediet før du fortsetter.
4

Hell et tilstrekkelig volum av agar til halv fylle fatet mens agar er fortsatt varm og flytende. Sørg for at overflaten er helt dekket. Ikke hell for mye eller la agar nå toppen av parabolen. Hold platene i en steril atmosfære ved at bunsenbrenner eller laminær strømningshette å løpe kontinuerlig. La platene for å stille og sett lokkene.
5

Tørk agarplater i ca 30 minutter til en time i en ovn satt ikke høyere enn 37 grader Celsius. Alternativt kan du la dem i laminær hette i tre minutter eller på en dekontaminerte laboratoriebenken i en lav trafikk område som ikke er trekkfulle for en dag eller to. Tørking platene stopper noen bakteriell løsning plassert på agaroverflaten fra bare fortynne ut og sklir av, i stedet for å danne kolonier som festes på agar.
6

forsiktig lagre platene i mørket og ved 4 grader Celsius. Stable tørket agar plater med sine bottoms opp slik at du kan tydelig se etikettene og for å hindre mikroorganismer og rusk fra å falle på agaroverflaten og forurenser dem. Sette retter tilbake i emballasjen, dekk med aluminiumsfolie og tape emballasjen lukket. Merke pakket plater med sitt innhold og dato for forberedelse. Du kan lagre platene i opptil to måneder og skal forkaste dem etter det.